K562感染病毒

包病毒

1. 提前准备好质粒，并通过琼脂糖凝胶电泳确认超螺旋比例正常。将PMD2G和PSAX2质粒分装至小管中，每次使用一管，以减少冻融次数。
2. 在12孔板或6孔板中铺板HEK293T细胞，分别向每个孔中加入1mL或2mL培养基。
3. 培养HEK293T细胞至90%汇合度，同时确保培养基未因长时间使用而变黄。
4. 使用Neofect进行转染。对于12孔板，每个样品使用90μL Opti-MEM，加入0.9μg穿梭质粒、0.3μg PMD2G和0.6μg PSAX2质粒，总计1.8μg质粒，然后加入1.8μL Neofect。（经常性忘记加包装质粒）
5. （可选）转染后12小时更换为新鲜培养基。如果穿梭质粒带有荧光标记，此时可在荧光显微镜下进行检测。
6. 转染后48小时收集病毒（培养基上清）。使用0.22μM滤器去除细胞碎片，或以4000rpm离心4分钟后过滤细胞碎片。建议提前准备好待感染的细胞，避免冷冻；若必须冷冻，请保存于-80℃。

感染病毒

1. 提前准备好待感染的K562细胞，并在感染前将其铺板至12孔板或6孔板中。
2. 确保细胞状态良好，感染病毒前更换新鲜培养基。
3. 12孔板中每孔接种0.5 million细胞，6孔板中每孔接种1 million细胞。
4. 将病毒悬液加入培养基中。具体细胞数量与病毒体积的比例需根据实验条件进行优化。需要注意的是，相同体积的病毒悬液在不同批次中可能具有不同的病毒滴度。
5. 将孔板以1000×g离心，室温条件下离心30分钟。
6. 离心后将孔板放回培养箱中继续培养。
7. 感染12小时后更换新鲜培养基。（这步容易忘）
8. 感染后24小时，加药物筛选或跑FACS。